NAD激酶(NADK)生化测试试剂盒
测定原理:
根据Ca++ Mg++-ATP酶分解ATP生成ADP及无机磷,通过测定无机磷的量来确定ATP酶活性高低。
需自备的仪器及用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:液体100mL ×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前加入6mL蒸馏水充分混匀待用;
试剂三:液体2mL×1 瓶,4℃保存。
试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存。用时加入3mL双蒸水, 4℃保存。
试剂五:粉剂×1瓶, 4℃保存。用时加入25mL双蒸水,溶解后4℃保存一周。
试剂六:粉剂×1瓶, 4℃保存。用时加入25mL双蒸水,溶解后4℃保存一周。
试剂七:液体25mL×1 瓶,室温保存。
试剂八:10mmol/L 标准磷贮备液 10mL×1 瓶,4℃保存。
0.5μmol/mL 标准磷应用液配制:将试剂八 20倍稀释,即取0.1mL试剂八加1.9mL蒸馏水充分混匀。
定磷剂的配制:按H2O: 试剂五:试剂六:试剂七=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效,若是蓝色则为磷污染,定磷剂现用现配。
注意:配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。
样品酶液的制备:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
组织:称取约0.1g组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
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