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小鼠ELISA试剂盒标准品的稀释与加样说明

发布时间: 2023-02-06  点击次数: 679次
  小鼠ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白细胞介素水平。用纯化的小鼠白细胞介素8抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素,再与HRP标记的白细胞介素8抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素8呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠白细胞介素浓度。
  小鼠ELISA试剂盒标准品的稀释与加样:
  在酶标包被板上设标准品孔10孔,在一、二孔中分别加标准品100μl,然后在一、二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;
  然后从一孔、二孔中各取100μl分别加到三孔和四孔,再在三、四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;
  然后在三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到五、六孔中,再在五、六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;
  混匀后从五、六孔中各取50μl分别加到七、八孔中,再在七、八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从七、八孔中分别取50μl加到九、十孔中,再在九、十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从九、十孔中各取50μl弃掉。
  加样时分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
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