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​ELISA实验过程中需要注意什么

发布时间: 2022-08-03  点击次数: 614次


1.样本处理
首先对于ELISA来说,正确的处理样本是保证检测准确性和正确性的第一步。
正式实验之前最好使用少量的样本进行预实验,可以选择2、5、10倍稀释样本,选择合适的稀释比例进行实验,亲身经历告诉大家,千万不能图省事,不然浓度太大超过检测限,简直就是赔了夫人又折兵!!!同时,样本的保存也非常重要,保存不当或在冰箱里保存过久的样本,血清中lgG可聚合成多聚体,导致结果偏高。建议五天内检测的血清样本可短暂存放4℃,一周之后测定的血清样本应该低温冻存,同时切忌反复冻融。如果是血清样本,也要主要样本不能有溶血、脂血和细菌等残留,这些样本中存在非特异性显色影响结果。                                                                                                 2.标准品如何使用
标准品的配置一般都是按照说明书进行的倍比稀释,很多厂家提供的盒子里标准品是冻干粉,同时要求每次使用新的冻干标准品,那重复使用是否会有影响呢?这里我又很有经历的含泪告诉大家,咨询过国产D牌的技术支持,建议是如果非用不可,那么标准品打开后一定要注意保存,且尽量不要相隔太久。我也曾经试过,冬天放置一周的标准品,再次使用差别不大,但是放太久的标准品建议狠心丢掉,不要使用。因此小伙伴们设计实验一定要充分,尽量备好样本再进行操作!     3.操作过程需牢记
首先,实验进行前要先将试剂盒从冰箱中恢复室温。
加样时尽量将液体加入孔底,不要有气泡,提供一个小tip!因为有气泡会影响吸光度值的测定,检测之前可以使用小枪头很容易戳破气泡。
洗板时注意不要间隔太久,尽量避免干板现象!
按照试剂盒批号和保质期使用,不同批次的试剂严禁混合使用,同时试剂盒使用后剩余的孔板一定要和干燥剂一起保存,防止潮湿。
目的蛋白含量低的样本可以咨询厂家是否可以适当延长孵育时间,使其充分结合。(本人使用不同厂家的试剂盒要求是不同的,有需要严格按照说明时间进行,防止非特异性结合,因此小伙伴们还是要多咨询一下!)

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